瓊脂糖凝膠濃度過低?:使用的瓊脂糖凝膠濃度過低也可能導(dǎo)致條帶波浪狀。通常使用1%濃度的膠進(jìn)行電泳較為合適,濃度過低會導(dǎo)致凝膠孔徑過大,DNA分子在電場中的遷移行為不穩(wěn)定?。
蛋白混合液通過層析柱時,與吸附劑具有親和能力的蛋白質(zhì)被吸附而滯留在層析柱中,沒有親和力的蛋白質(zhì)不被吸附,直接流出,從而與被分離的蛋白質(zhì)分開,然后選用適當(dāng)?shù)南疵撘海淖兘Y(jié)合條件將被結(jié)合的蛋白質(zhì)洗脫下來,從而達(dá)到分離提純的目的,這種分離純化蛋白質(zhì)的方法稱為親和層析。
免疫組化除正常的真實(shí)的陽性信號外常常會遇到不正常的背景著色,這些非正常的著色稱為“雜音”染色?!半s音”染色種類繁多,產(chǎn)生的原因也多種多樣,為了便于說明,遠(yuǎn)慕將其歸納為下面幾種。
膠體金法是由氯金酸(HAuCl4)在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下,可聚合成一定大小的金顆粒,并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài),形成帶負(fù)電的疏水膠溶液,由于靜電作用而成為穩(wěn)定的膠體狀態(tài),故稱膠體金。
注意實(shí)驗室的標(biāo)準(zhǔn)化問題,注意污染的存在,同時嚴(yán)格按照說明書上的操作應(yīng)該沒有問題。發(fā)現(xiàn)DNA污染,用DNAse I消化1小時,37度離心取上清的時候,一定要小心不要取到中間的膜和下面的液體。
HEPES是一種非離子緩沖液,在pH 7.2~7.4范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力,在高濃度時對一些細(xì)胞可能有毒。HEPES緩沖液可與低水平的碳酸鈉(0.34 g/L)共用,以抵消因額外加入HEPES引起的滲透壓增加。其安全濃度范圍是10~25 mmol/L。